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화학 | Column chromatography에 의한 시금치의 색소 성분 분리​

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작성자 캠프 담당자 작성일17-05-16 11:11 조회7,635회 댓글0건

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국립중앙과학관 세종과학실험 토론캠프​​

Column chromatography에 의한 시금치의 색소 성분 분리

 

 

 

 

1.실험목표

TLC판에서 시금치의 색소가 분리되는 모습을 관찰하고 이를 이용하여 Column Chromatography로 분리한다.
 

 

 

 

 

2. 실험재료

시금치 1, n-hexane, ethyl acetate(EA), methanol(MeOH), , sea sand, silica

 

 

 

 

 

 

3. 실험기구

비커, 둥근 플라스크, 막자사발과 막자, 유리막대, 분액깔대기(separatory funnnel), ring clamp, silica gel TLC (UV 활성, GF 254), TLC chamber, TLC용 모세관, 스탠드, 거름종이, TLCUV lamp (254 365nm), 깔대기, 핀셋, vacuum condenser, 스포이트

 

 

 

 

 

 

4. 실험방법   

[색소추출]

1. 시금치 한 포기 정도를 막자사발에 넣고 잠길 정도의 MeOH을 넣어 색소를 우려낸다.

2. MeOH의의 양과 비슷한 정도의 EA를 넣는다.

3. 1,2과정에서 얻은 용액을 거름종이에 여과한다. 

 

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사진1. 거름종이에 여과중인 시금치용액

 

4. 데시게이커를 이용하여 여과액을 응축시킨다.

 

 

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 사진2. 데시게이커를 이용하여 여과액을 응축하는 모습

 

 

 

 

[크로마토그래피]

<TLC>

1. 가로 2cm, 높이 5cm 정도의 TLC 판을 제작하고 아래에서 6mm정도 되는 지점에 연필로 평행하게 선을 그어놓는다.

 

2. n-hexane:EA=1:1 부피 비율이 되도록 전개액을 만들고 TLC chamber에 소량 붓는다.

 

3. 시금치 농축액을 TLC 모세관으로 찍어 TLC 판에 그어놓았던 선 위에 조그맣게 찍는다. (점의 지름이 3mm를 넘어가지 않도록 주의한다. ) 


 

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사진3. TLC판에 시금치 농축액으로 점을 찍은 모습

 


4. 3TLC 판을 2의 전개액에 담그고 전개액이 TLC 판의 꼭대기 까지 올라가기 전에 chamber에서 꺼낸다. 꺼낸 직후, 전개액이 마르기 전에 연필을 이용하여 전개액이 얼마나 올라갔는지 표시한다.

 

5. TLC 판을 육안으로도 살펴보고 UV lamp로도 관찰한다. (UV lamp로 관찰할 때에는 실험 공간을 최대한 암실로 조성한다. 


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사진4. UV lamp를 이용하여 관찰


6. Rf값을 비교하여 크로마토그로피에서 분리해낼 물질이 무엇인지 살펴본다.
 



 

<Column Chromatography>

1. 솜을 작게 뜯어 넣어 컬럼의 끝을 막는다.

 

2. sea sand를 컬럼에 조금 붓는다.

 

3. 실리카와 n-hexane을 섞어 silica gel을 만들고 2의 컬럼에 붓는다. 


 

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     사진5. 컬럼에 sea sand, silica gel을 넣은 모습. 

 


4. 시금치 농축액을 스포이트로 실리카 위에 고르게 얹어준다.

 

5. loading이 끝나면 실리카가 드러나기 직전까지 농축액을 내려주고 sea sand1~2cm 정도 부어준다.

 

6. 전개액을 컬럼에 채우고 계속해서 내려준다. 이 과정에서 로딩된 농축액, 실리카, 시샌드 등이 최대한 편평하게 유지될 수 있도록 한다. 


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사진6. 컬럼을 통과하는 시금치 색소

 

7. 컬럼을 통과하여 내려오는 용액을 시험관에 순서대로 받는다.

 

8. 시험관의 내용물을 각각 TLC로 찍어 물질의 성분을 확인한다. 

 

 

 

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