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생명과학 | Rat의 혈액을 이용한 혈당검사와 Bradford assay를 통한 효소 단백질 정량

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작성자 캠프 담당자 작성일17-06-07 13:44 조회3,485회 댓글0건

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국립중앙과학관 세종과학실험 토론캠프

Rat의 혈액을 이용한 혈당검사와 Bradford assay를 통한 효소 단백질 정량

 

 

 


 

 

1. 실험목표

 

우리 몸에서 호르몬 혹은 효소로 발현하는 단백질을 정량할 수 있는 Bradford assay를 수행하여 우유의 단백질 양을 측정할 수 있다.

 

 

 

​2. 실험재료


6주령 숫컷 Rat(정상적인 식사), 6주령 숫컷 Rat(절식), 1mg/mlBSA, ethyl ether, 증류수, 생리식염수

 

 

 

3. 실험기구

 

해부판, 해부기 세트, 은박지, petri dish, 면도칼, 라텍스 글러브, 마스크, 1ml 주사기, 비커, 두꺼운 천(행주), 겸자, 봉합침 달린 봉합사, 탈지면, 사체통, 분광광도계, 원심분리기, 혈당측정기, 피펫&피펫팁, 50ml tube & rack, micro tube & rack, 유리막대, 96well plate

 

 

 

 

4. 실험과정

 

1. 공복상태를 유지한 Rat과 먹이를 섭취한 Rat을 준비한다.

 

2. 화학적 마취를 통해 Rat을 마취하고 은박지가 깔린 해부판 위에 누인다.

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사진1. 마취한 Rat을 눕혀 고정하는 과정

 

 

3. 알콜솜으로 채혈부위를 소독한 뒤 채혈을 한다.

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사진2. 주사기를 이용해 채혈한 후 혈당측정기로 혈당을 확인하는 모습

 

4. 혈당측정기를 이용하여 두 실험군의 혈당을 확인, 비교분석한다.

   

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사진3. 절식을 한 Rat의 혈당 결과는 94

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사진4. 절식을 하지않은 Rat의 혈당 결과는 141



 

5. Rat을 복부가 위를 향하도록 놓은 후, 두 뒷다리의 사이로부터 턱에 이르기까지 절개한다.

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사진5. 가위와 집게를 이용해 절개한 Rat​

 

6. 혈액을 제거하고 간을 관찰하고 적출해서 50ml tube에 보관한다.


 

7. 소화기관을 관찰하고 대변을 제거 후 적출해서 50ml tube에 보관한다.

 

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사진6. 간과 소화기관을 관찰하고 적출해서 50ml tube에 보관한 모습

 


8. 복부가 아래가 향하도록 Rat을 뒤집은 후 두개골이 드러나도록 머리가죽을 절개한다.

 

9. 두개골을 절개하고 대뇌를 관찰한다.

 

10. Rat의 뇌를 적출하여 소뇌, 뇌간, 연수등을 관찰하고, 뇌가 적출된 자리에서 척수를 관찰한다.

 

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사진7. 뇌를 적출하기위해 두개골을 절개


11. 50ml tube에 담긴 간과 소화기관들을 각각 생리식염수로 세척한다.

 

12. 1mg/mLBSA solution을 만들고 증류수에 희석을 통해 각각 0, 5, 7.5, 10, 12.5, 15 BSA가 포함된 용액을 제조한다.

 

13. 위 과정에서 제조한 6가지 농도의 BSA희석액을 하나의 96well plate에 한칸씩

       100씩 담는다.

 

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사진8. BSA희석액을 96well plate에 담은 모습



14. 소화기관을 이용해 제작한 시료를 96well plate1x, 10x, 100x 희석 시킨 상태로 각각 한칸씩, 100씩 담는다.

 

15. bradford solution(5x)를 용액이 들어있는 모든 well50씩 넣는다.

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사진9. 희석시킨 시료를 Bradford 용액이 들어있는 well에 넣은 모습

 

 

16. 분광광도계를 통해 분석한다.

 

 

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사진10. 분광광도계를 통해 96well plate를 분석

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사진11. 분광광도계를 통해  효소 단백질 정량을 분석​한 결과물  

 





 

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