마우스 모델에서 혈당측정 및 비타민 C검정 > 실험주제별 갤러리

본문 바로가기



의과학 | 마우스 모델에서 혈당측정 및 비타민 C검정

페이지 정보

작성자 캠프 담당자 작성일17-07-08 19:38 조회64회 댓글0건

본문

국립중앙과학관 세종과학실험 토론캠프

마우스 모델에서 혈당측정 및 비타민 C검정

 

 

 

1.실험목표

 

혈액중 혈당과 비타민C 측정을 통해 인체가 가지고 있는 항상성을 이해해 본다.

 

 

 

 

2. 실험재료

 

Balb/c mouse, Ethyl ether, 70% 알코올, EDTA, sodium citrate, 증류수, 혈당측정기 (글루코렙, 혈당측정지), , DPIP (2,6-dichlorophenolindophenol) C12H6Cl2NO2Na(MW290.1g/mol), 비타민 C(L-Ascorbic acid) (MW 176.13 g/mol) , 1% oxalic acid (MW 126.07 g/mol), 오렌지 주스(미닛메이드)

 

 

 

 

 

3. 실험기구

2ml syringe, 비커, 해부기 세트, 마이크로 파이펫 (20 P, 100 P) tip, micro tube (1.5ml) rack, 1회용 스포이드, 1.5ml 원심분리기, , Vortex,15ml 튜브, 시험관대, 스포이트, 해부용가위, 핀셋, 해부용, 페트리디쉬, 비이커, hot plate, 깔대기, 삼각플라스크100ml (2), 메스실린더 10ml (1), 부피플라스크 100ml(2), 피펫3, 흰종이

 

 

 

4. 실험방법  

 

실험 1. 혈액의 채취와 혈장의 분리


쥐의 심장에서 혈액을 채취

 

혈액채취전 사료를 한 마리는 먹이고 다른 한 마리는 먹이지 않는다.

경우에 따라서 과도한운동을 시켜본다.

 

1. Ethyl ether를 사용하여 콜레스테롤 추출할 mouse을 마취한다

 

2. 마우스를 해부판위에 고정후 명치부분에서 왼쪽으로 2mm부분에서 45도 각도로 EDTA를 적신 2ml 주사기를 이용하여 주사기를 찔러넣는다.

 

3. 앞뒤로 주사기를 움직이면서 혈액을 채취한다. 무리하게 주사기로 피를 채혈하지않고 앞뒤로 주사바늘을 움직이다 보면, 혈액이 자연스럽게 심장의 박동에 맞추어서 빨려올라온다.

 

4. 해부부위를 알콜로 소독한 뒤 가위를 가위로 복부를 절개한 뒤 복강 안에 있는 주요기간을 확인하다.

 

5. 채혈한 혈액은 5% sodium citrate으로 100ul가 담긴 1.5tube에 모아둔다. 

 

 

4a6230e7efc7ca71c7cfdf2a00aa3b8a_1499510

4a6230e7efc7ca71c7cfdf2a00aa3b8a_1499510

 

<그림1. 마취된 마우스의 심장으로부터 주사기로 혈액을 채취하는 중이다.>

 

 

 

원심분리를 이용한 혈장 분리

 

1. 원심분리기를 2,000rpm, 20min, 20with no brake로 설정하고,

sample tube를 원심분리 시켜준다.

 

2. 새로운 tube에 원심분리 시킨 혈청을 마이크로 피펫을 이용해 400-500ul를 옮겨준다. 

 

 4a6230e7efc7ca71c7cfdf2a00aa3b8a_1499510

<그림2. 채취된 혈액을 원심분리하여 혈장을 분리한 모습이다.>

 

 

혈당측정지를 이용한 측정

 

1. 원심분리전의 혈액 일부를 콜레스테롤 측정지와 혈당측정지에 소량 뭍힌후 혈당측정기를 이용해서 콜레스테롤 및 혈당을 측정한다.

 

2. 원심분리후 콜레스테롤 측정지와 혈당측정지에 소량 뭍힌후 혈당측정기를 이용해서 콜레스테롤 및 혈당을 측정한다.

 

3. 다음표를 작성해본다

 

비타민C

혈당

식전

식후

식전

식후

원심분리전

 

 

 

 

원심분리후

 

 

 

 

 

4. 운동전후에 콜레스테롤 및 혈당의 수치와 원심분리전과 후에 수치를 비교해본다

 

4a6230e7efc7ca71c7cfdf2a00aa3b8a_1499510

 

<그림3. 채취된 혈액을 혈당측정기를 이용해 혈당측정하는 모습이다.>

 

 

비타민 C 표준용액으로 Dye 표준용액의 적정


1. 1%(질량비) Oxalic acid 100ml 를 제조한다.

 

2. DPIP 와 비타민 C 표준용액을 제조한다.

 

3. 비타민 C 표준용액 : Ascorbic acid 0.01g 을 정확하게 측정해서 100ml 부피플라스크에 1% oxalic acid로 녹인다.

 

4. DPIP 표준용액 : DPIP 0.038g 을 정확하게 측정해서 100ml 부피플라스크에 증류수로 녹인다. (Hood에 준비된 DPIP 표준용액을 사용한다.)

 

비타민 C 표준용액을 제조할 때 Ascorbic acid는 대략 0.01g 정도를 취하고 그 질량을 정확히 체크하면 됩니다.

 

5. 비타민 C 표준용액 약 5ml 를 이용해 뷰렛을 씻는다.

 

6. 뷰렛 또는 스포이드에 비타민 C 표준용액으로 채운다.

 

7 DPIP 표준용액 5.00ml을 정확히 측정하여 100ml 삼각플라스크에 넣는다.

 

DPIP 표준용액의 양이 정확하지 않으면 오차가 커지므로 주의하세요!!

 

8. 삼각플라스크 밑에 흰 종이를 깔고 적정을 시작한다.

 

9. 용액의 색이 붉은 색에서 투명하게 변하는데, 1% oxalic acid의 색과 같아질 때가 종말점이다.

 

10. 실험 간 오차가 0.1ml 이내가 되도록 실험을 반복한다.(3)

 

 

실험2. 주스에 들어있는 비타민 C 정량 분석


1. 오렌지 주스 25ml100ml 부피플라스크에 넣고 1% oxalic acid 용액으로 100ml 까지 묽힌다. (이를 sample solution이라고 하자.)

 

2. DPIP 표준용액 5.00ml을 정확히 측정하여 100ml 삼각플라스크에 넣는다.

 

3. 삼각플라스크 밑에 흰 종이를 깔고 적정을 시작한다

 

댓글목록

등록된 댓글이 없습니다.


관리자