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의과학 | 혈액과 식물로부터 DNA추출​

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작성자 캠프 담당자 작성일17-08-24 16:12 조회44회 댓글0건

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국립중앙과학관 세종과학실험 토론캠프

혈액과 식물로부터 DNA추출

 

 

 

 

1.실험목표

 

쥐로부터 얻은 혈액을 이용하여 혈액 특징을 이해하고, 식물과 혈액으로부터 추출된 DNA의 구조 및 활용성을 알아본다.

 

 

 

 

2. 실험재료

 

마우스 혈액, DNA extraction kit, TAE, Agarose LE, gelred, DNA ladder, 로딩 dye, PBS, 에탄올, 증류수, 아세트올세인, 소금 1kg, 바나나, 주방세제(트리오)

 

 

 

 

3. 실험기구

 

전자렌지, 전자저울, 약수저, 삼각플라스크, 온도계, 항온수조, microtube centrifuge, 전기영동장치, uv detector, 마이크로파이펫&, etube, etube rack, 킴와이프스, 라텍스글러브, 필터페이퍼 유산지, 나무젓가락, 막자사발, 비이커, 거즈

 

 

 

4. 실험방법    

 

<혈액으로부터 DNA추출>

 

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사진1. 혈액DNA추출 키트의 모습이다.

 

1. 5ml 마이크로튜브에 네임펜으로 이름을 적은 다음, proteinase K 20μl를 넣는다.

(ex : 1조의 1tube라면 1-1, 1조의 2tube라면 1-2로 기록한다)

 

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사진​2. 채혈침을 이용하여 혈액을 추출한 모습이다.

 

2. Protase K가 들어있는 tube에 준비된 혈액을 20μl를 넣고, RNase A4 μl넣고 3분간 실온에 방치한다.

 

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사진​3. protase k를 넣고 반응시키는 모습이다.

 

3. PBS를 이용하여 tube의 전체 volum220μl가 되도록 한다. (PBS 176μl) 그리고, tubeAL buffer 200μl를 넣어주고 vortexing, 56°C 10분간 방치한다.

 

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사진​4. 56에서 반응시키는 모습이다.

 

4. Lysis가 완료되면 tubeethanol(96-100%) 200μl를 넣고 섞어준다. 그리고 spin-down해준다.

 

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사진​5. 에탄올을 넣고 원심분리한 모습이다.

 

5. DNeasy Mini spin column이 장착된 2ml collection tube4번의 용액을 모두 옮겨 담는다.

원심분리기를 이용하여 8,000rpm으로 1분간 돌려준다.

 

6. 새로운 collection tubeDNeasy Mini spin column을 옮겨 담은 뒤, AW1 buffer500μl를 넣어주고 원심분리기를 이용하여 8,000rpm으로 2분간 돌려준다.

 

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사진​6. BW wash버퍼로 원심분리한 모습이다.

 

7. 다시 새로운 collection tubeDNeasy Mini spin column을 옮겨 담은 뒤, AW2 buffer500μl를 넣어주고 원심분리기를 이용하여 8,000rpm으로 1분간 돌려준다. 그리고 다시 14,000rpm으로 3분간 돌려준다.

 

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사진​7. TW wash버퍼로 원심분리한 모습이다.

 

8. 새로운 1.5ml tubeDNeasy Mini spin column을 옮긴 뒤 뚜껑을 열어 남은 buffer가 날아가도록 잠시 두고, AE buffer 100μl를 필터에 가까이 넣어준다. 3분간 실온에 방치한다.

 

9. 원심분리기를 이용하여 14,000rpm으로 1분간 돌려준다.

 

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사진​8. DNA를 추출한 모습이다.

 

 

 

 

 

<식물에서 DNA 추출>

 

1. 브로콜리, 키위, 바나나를 각각 50g씩 막자사발 안에 넣고 칼 혹은 가위로 잘게 자른다. 키위나 바나나는 껍질을 벗긴 후 안 부분만을 이용하여 잘게 자른다. (대략적으로 50g은 키위 반개, 바나나 반개, 주먹만한 브로콜리 절반)

 

2. 작은 조각의 샘플을 막자사발에 넣고 막자로 아주 잘게 간다.

 

3. 실험 전에 바로 만든 소금-세제액 100ml를 막자사발에 넣고 약 10분 동안 조심스럽게 섞으면서 갈아준다.

 

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사진1. 막자사발에 샘플을 넣고 잘게 갈은 모습이다.

 

4. 구멍이 작은 체를 이용하여 용액을 걸러 찌꺼기를 제거한다.

 

5. 나무젓가락을 비커 벽에 대고 조심하면서 에탄올이 나무 젓가락을 타고 내려가게 하면서 조심스럽게 에탄올을 비이커에 넣는다. (에탄올은 세포 추출액 부피의 2배를 넣어준다.)

 

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사진​2. 샘플이 들어있는 비이커에 에탄올을 조심스럽게 넣는 모습이다.

 

6. 흰색의 가는 선 모양의 물질이 생기면 먼저 돋보기로 관 찰한 후 나무젓가락으로 여러 번 휘감아 올린다. 흰 색깔의 물질이 DNA가 엉켜서 생긴 것이다.

 

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사진​3. 흰색의 가는 선모양으로 엉기는 DNA의 모습이다.

 

7. 추출한 DNA1ml 증류수에 녹인다. (1.5ml의 작은 튜브(e-tube)를 사용하면 편하다.)

 

 

 

 

< DNA 확인 1 >


1. 추출된 DNApiper을 이용하여 거름종이에 5μl, 10μl, 20μl 묻혀서 스며들게 한 뒤, 잘 말린다.

 

2. 0.2% 아세트올세인 염색약(원액을 5배 희석)15분 정도 넣어둔다.

 

3. 비커에 물을 끓여 열탕에서 5분간 여분의 아세트올세인 용액을 제거한다. 탈색 후 색을 관찰한다.

 

 

< DNA 확인 2 - Gel 전기영동>

 

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