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생명과학 | 배지(Medium)의 제조와 미생물의 순수배양

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작성자 캠프 담당자 작성일17-11-08 17:02 조회438회 댓글0건

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국립중앙과학관 세종과학실험 토론캠프

배지(Medium)의 제조와 미생물의 순수배​양

 

 

 

 

1.실험목표

 

미생물을 배양하기 위해서 복합배지의 종류인 LB 배지를 제조하고, 도말평판법과 획선평판법으로 미생물을 접종하여 순수배양을 할 수 있다​.

 

 

 

2. 실험재료

 

NaCl, Yeast extract, Tryptone, 한천 (Agar), 증류수
액체배지에 배양되어 있는 대장균

 

  

3. 실험기구

 

Petri-dish, 250mL 플라스크, 메스실린더, 저울, 약수저, 유산지, Hot plate 또는 전자레인지, Stirrer & magnetic bar, 세모난 유리막대, 백금이, 알코올램프, 에탄올, 비커

 

 

 

4. 실험방법 

 

실험 1> LB (Luria-Bertani) 배지의 제조

 

1) LB 배지의 조성은 아래의 표와 같다. 각 성분의 % 농도를 확인하고, 전체 100mLLB 배지를 제조 한다고 가정 했을 때의 각 성분의 양을 적는다. 그리고 필요한 양만큼 무게를 재서 준비한다.

 

LB 배지 조성표

NaCl 1%

g

Yeast extract 0.5%

g

Tryptone 1%

g

한천(Agar) 1.5%

g

증류수

mL

 

 

 

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사진1. 저울을 이용해서 배지 성분을 측정하는 모습이다.

 

2) LB 배지 제조에 필요한 성분들을 용액으로 만들고, 멸균하기 위해 멸균기를 사용하여 멸균하거나, 한천을 녹이기 위해 Hot plate 또는 전자레인지를 사용한다. 

 

3) 한천이 녹은 것을 확인한 LB 배지를 굳지 않은 상태로 유지하면서 Petri-dish에 기포가 생기지 않도록 1/2 높이로 조심스럽게 부어준다. 주의: 매우 뜨거운 상태의 LB 배지는 적당히 식혀서 부어준다.

 

4) LB 배지가 잘 굳도록 Clean-bench에 넣어 두고 1시간 정도 굳힌 후에 Petri-dish를 뒤집어서 냉장상태로 보관해 두고 필요할 때마다 꺼내 쓴다.

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사진2. LB배지를 녹인후 페트리디쉬에 붓는 모습이다.

 

 

 

 

실험 2> 미생물 배양을 위한 Spreading & Streaking 수행

 

1) 피펫을 사용하여 한천배지의 중앙에 소량의 미생물 시료를 떨어뜨린다.

 

2) 구부러진 유리막대를 에탄올에 담근다.

 

3) 에탄올에 적신 유리막대를 알코올 램프의 불꽃에 통과시켜 휘어진 부분을 멸균한다.

주의: 에탄올이 흘러 불꽃이 번지지 않도록 주의 한다.

 

4) 멸균한 유리 막대를 이용해 한천 배지에 시료가 골고루 퍼지도록 도말한다. 

 

5) 백금이를 에탄올에 담근다.

 

6) 에탄올에 적신 백금이를 알코올 램프의 불꽃에 통과시켜 루프 부분을 멸균한다.

 

7) 멸균한 백금이를 한천배지의 한쪽 구석에서 앞 뒤로 식혀주고 피펫을 사용하여 한천배지의 한쪽 구석에 소량의 미생물 시료를 떨어뜨린다.

 

8) 아래의 그림과 같은 순서로 Streaking 한다.

 

 

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        (1)단계에서 최대한 미생물 시료를 많이 Streaking 하고 (2),(3),(4) 단계에서는 최대한 한 번에 그어서 Streaking 하여, Colony로 분리 될 수 있도록 한다.

 

 

9) Spreading & Streaking 한 배양배지를 37배양기에서 정치배양 한다.

 

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사진3. 만든 아가트리디쉬에 준비된 미생물을 접종한 모습이다. 

 

 

 

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